大规模新型冠状病毒核酸检测在第三方独立实验室的实践经验

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2020.01.010

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2020, Vol. 08 ›› Issue (01) : 54 -59. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2020.01.010

所属专题：文献；

经验交流

大规模新型冠状病毒核酸检测在第三方独立实验室的实践经验

刘勇¹, 曾征宇², 江真君², 刘丹平², 陶然³, 任婵君⁴, 杜娟⁴, 李淼⁴, 谢曙光³, 刘为敏², 李根石⁵, 李慧源⁵, 程雅婷¹^,^†(

)

^1. 510005　广州，广州金域医学检验中心；510005　广州，国家呼吸系统疾病临床医学研究中心病毒诊断研究中心；510006　广州，广州医科大学金域检验学院
^2. 510005　广州，广州金域医学检验中心
^3. 510005　广州，广州金域医学检验中心；510006　广州，广州医科大学金域检验学院
^4. 430100　武汉，武汉金域医学检验所
^5. 430100　武汉，武汉金域医学检验所；430100　武汉，国家呼吸系统疾病临床医学研究中心病毒诊断研究分中心

收稿日期:2020-02-20 出版日期:2020-02-28
通信作者: 程雅婷

Practical experience of large-scale detecting 2019-nCOV in third-party independent laboratories

Yong Liu¹, Zhengyu Zeng², Zhenjun Jiang², Danping Liu², Ran Tao³, Chanjun Ren⁴, Juan Du⁴, Miao Li⁴, Shuguang Xie³, Weimin Liu², Genshi Li⁵, Huiyuan Li⁵, Yating Cheng¹^,^†()

^1. Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory, Guangzhou 510005, China; Research Certer for Clinical Virology of National Clinical Research Center for Respiratory Disease, Guangzhou 510005, China; Guangzhou Medical University, Guangzhou 510006, China
^2. Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory, Guangzhou 510005, China
^3. Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory, Guangzhou 510005, China; Guangzhou Medical University, Guangzhou 510006, China
^4. Wuhan Kingmed Center for Clinical Laboratory, Wuhan 430100, China
^5. Wuhan Kingmed Center for Clinical Laboratory, Wuhan 430100, China; Research Certer for Clinical Virology of National Clinical Research Center for Respiratory Disease, Wuhan 430100, China

Received:2020-02-20 Published:2020-02-28
Corresponding author: Yating Cheng
About author:
Corresponding author: Cheng Yating, Email: labcyt@kingmed.com.cn

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引用本文：

刘勇, 曾征宇, 江真君, 刘丹平, 陶然, 任婵君, 杜娟, 李淼, 谢曙光, 刘为敏, 李根石, 李慧源, 程雅婷. 大规模新型冠状病毒核酸检测在第三方独立实验室的实践经验[J]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2020, 08(01): 54-59.

Yong Liu, Zhengyu Zeng, Zhenjun Jiang, Danping Liu, Ran Tao, Chanjun Ren, Juan Du, Miao Li, Shuguang Xie, Weimin Liu, Genshi Li, Huiyuan Li, Yating Cheng. Practical experience of large-scale detecting 2019-nCOV in third-party independent laboratories[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2020, 08(01): 54-59.

2019年底爆发于武汉的新型冠状病毒肺炎，作为急性呼吸道传染病已纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，按甲类传染病管理。《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案》中将呼吸道标本的逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测核酸作为确诊方案之一，规范、高效的新型冠状病毒核酸检测流程是确保人员安全、结果可靠、满足疫情防控的必要措施。金域医学承接大规模检测任务，在专家、同道的建议下不断优化流程，此文陈述相关的实践经验。

关键词: 新型冠状病毒, 聚合酶链反应, 防护

A novel coronavirus pneumonia outbroke in Wuhan at the end of 2019. As an acute respiratory infectious disease, it has been included in class B infectious diseases under the infectious disease prevention act of the People's Republic of China and is managed according to class A infectious diseases. Based on the "Novel coronavirus pneumonia diagnosis and treatment formula", the detection of viral nucleic acid in respiratory tract specimen by RT-PCR is one of the confirmed plans of this disease. It is to be noted that a standardized and efficient novel coronavirus nucleic acid detection process is necessary to ensure the safety and reliability of laboratory personnel and to meet the requirements of epidemic prevention and control. KindMed Diagnostics undertakes large-scale testing tasks of 2019-nCOV and constantly optimizes the process under the advice of experts and colleagues. This paper presents here the relevant practical experience.

Key words: Novel coronavirus, Polymerase chain reaction, Protection

表1 物流防护规范

方面	规范内容
承运资质	委托检测单位向省卫健委或防控防疫办公室指定单位申领《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输准运证》后，方可承接样本运输
人员防护	均需要接受专项的生物安全培训并考核通过，储备后备队伍应急匹配防控要求，收取样本按表2执行，工作服使用75%乙醇喷洒后清洗
包装防护	新冠样本依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》^[4]、《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》^[5]和WHO所提出的"三层包装"标准之外，额外增加2层标本袋防护，分别套于第一层的样本主容器和第二层的95 kPa罐子外，减少样本、罐子、箱子三者之间的直接接触，并在防护容器上喷洒75%乙醇以减少样本的交叉传播。不同种类的包装防护按下表3执行。标本箱、95 kPa罐子、冰盒采用1000 mg/L含氯消毒液每日清洁消毒
车辆配置	专项运输，一车两人，确保样不离箱、箱不离车、车不离人，车辆每日使用1000 mg/L含氯消毒液消毒

表1 物流防护规范

方面	规范内容
承运资质	委托检测单位向省卫健委或防控防疫办公室指定单位申领《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输准运证》后，方可承接样本运输
人员防护	均需要接受专项的生物安全培训并考核通过，储备后备队伍应急匹配防控要求，收取样本按表2执行，工作服使用75%乙醇喷洒后清洗
包装防护	新冠样本依据《病原微生物实验室生物安全管理条例》^[4]、《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》^[5]和WHO所提出的"三层包装"标准之外，额外增加2层标本袋防护，分别套于第一层的样本主容器和第二层的95 kPa罐子外，减少样本、罐子、箱子三者之间的直接接触，并在防护容器上喷洒75%乙醇以减少样本的交叉传播。不同种类的包装防护按下表3执行。标本箱、95 kPa罐子、冰盒采用1000 mg/L含氯消毒液每日清洁消毒
车辆配置	专项运输，一车两人，确保样不离箱、箱不离车、车不离人，车辆每日使用1000 mg/L含氯消毒液消毒

表2 不同来源样本收取人员的防护配置

物品	普通医院的常规样本收取	新冠指定接收医院的常规样本收取	指定单位新冠样本收取
一次性医用外科口罩	√	?	√
N95口罩	?	√	√
手套	单层	双层	双层
白大褂	√	√	?
一次性头套/工作帽/鞋套	√	√	√
防护服	?	√（视科室）	√
便携式乙醇喷壶（含75%乙醇）/手消毒液	√	√	√
护目镜	?	√	√
生物安全包	√	√	√

表2 不同来源样本收取人员的防护配置

物品	普通医院的常规样本收取	新冠指定接收医院的常规样本收取	指定单位新冠样本收取
一次性医用外科口罩	√	?	√
N95口罩	?	√	√
手套	单层	双层	双层
白大褂	√	√	?
一次性头套/工作帽/鞋套	√	√	√
防护服	?	√（视科室）	√
便携式乙醇喷壶（含75%乙醇）/手消毒液	√	√	√
护目镜	?	√	√
生物安全包	√	√	√

表3 不同来源样本包装的防护配置

用途		物品	普通医院的常规样本收取	新型肺炎指定接收医院的常规样本收取	指定单位取"新型冠状病毒样本"的特定性收取
第一层		主容器	医疗机构负责
第二层（样本防护）		标本袋	√	√	√
		吸附棉	?	?	√
		95KPA罐	?	?	√
?	辅助材料	泡沫试管架	√	√	√
		标本袋/标本盒	√	√	√
		缓冲物	√	√	√
第三层（样本运输）		常规标本箱	√	√	?
第三层（样本运输）		UN2814密封箱	?	?	√
?	制冷剂	冰盒	√	√	√
?	温度检测设备	温度计	√	√	√
?	消毒	物表消毒剂	√	√	√

表3 不同来源样本包装的防护配置

用途		物品	普通医院的常规样本收取	新型肺炎指定接收医院的常规样本收取	指定单位取"新型冠状病毒样本"的特定性收取
第一层		主容器	医疗机构负责
第二层（样本防护）		标本袋	√	√	√
		吸附棉	?	?	√
		95KPA罐	?	?	√
?	辅助材料	泡沫试管架	√	√	√
		标本袋/标本盒	√	√	√
		缓冲物	√	√	√
第三层（样本运输）		常规标本箱	√	√	?
第三层（样本运输）		UN2814密封箱	?	?	√
?	制冷剂	冰盒	√	√	√
?	温度检测设备	温度计	√	√	√
?	消毒	物表消毒剂	√	√	√

表4 实验室人员防护安全标准

内容		频次
实验前-前
?	实验室地面（包括运输通道）用1000 mg/L含氯消毒液喷洒消毒，自然挥发	每日
?	公共区域表面（含电梯、门把手等）用1000 mg/L含氯消毒液喷洒消毒，自然挥发	每日
?	标本运输至实验室，接收开箱，用75%乙醇喷雾消毒，从密封袋取出后，再次喷雾消毒	每日
实验前
?	当天参与新冠病毒检测的工作人员实验前需登记身体状态，实验前测量体温，正常方可实验	每日
?	工作人员当天个人防护穿戴检查：	每日
?	1.双手轻按口罩，刻意呼吸，空气未从边缘漏出；刻意吸气，口罩立即稍凹陷	?
?	2.尽量将鞋、鞋带都包入鞋套	?
?	3.穿着顺序：洁净区：洗手、第一副乳胶手套、医用帽子、N95口罩、防护镜、鞋套、防护服半污染区：第二副乳胶手套	?
?	当天的生物安全柜开关机、风速、紫外线灯、前挡玻璃开启高度等都正常	每日
?	打开样本容器或有可能产生气溶胶的操作，必须在生物安全柜内进行	每日
实验中		?
?	PCR各室之间的试剂、样本等传递使用传递窗	每日
?	PCR外房屋间的样本转运使用带盖的专用转运箱，使用1000 mg/L含氯消毒液擦拭消毒	每日
?	离心管朝同方向放置，使用吸痰器吸上清，必要时吸头拉长确保能在生物安全柜操作	每日
?	实验后
?	物品清理：当天实验完成后所有与新冠病毒检测相关的物品需打包；生物安全柜内物品整理，废物清理，排风口不能被挡住	每日
?	扩增结束后的八联管用密封袋装好，并用5500 mg/L有效氯消毒水对密封袋内外部进行消毒，置于废物桶中	每日
?	清洁消毒：当天实验完成后新冠病毒检测的医疗废物都需要高压消毒灭菌，含防护服。台面、生物安全柜内部表面、仪器表面、地面等　都需要使用1000 mg/L含氯消毒液擦拭消毒	每日
?	工作人员当天个人防护脱弃检查：	每日
?	鞋套从后部反向拉开，慢慢卷至鞋头	?
?	右手轻拉左手手套边，污染面反向里面，左手从右手手套边的里面反向拉，避免接触手台外面	?
?	防护衣里面反过来切忌扬起，切忌接触自身衣物，卷好丢弃	?
?	双手从后脑勺插入头套撑开脱下，从里向外卷起丢弃	?
?	眼罩、面罩放进装有2000 mg/L的专用浸泡桶中，浸泡10~20 min，再用清水冲洗干净。擦干后放置在洁净区进行紫外消毒	?
?	脱弃顺序：污染区：第二副乳胶手套、防护服	?
?	半污染区：手消毒、护目镜、N95口罩、医用帽子、鞋套、第二副乳胶手套、洗手	?
?	当天PCR室所有工作完成后，使用移动紫外线灯消毒1 h	每日
?	在医疗废水中按比例加入消毒片，使含氯浓度达到2000 mg/L	每日
?	应客户要求的新冠样本的储存需双人双锁	每日
?	高压灭菌温度和时间为121℃ 30 min，指示卡变色符合监测要求	每日
?	若出现样本泼洒污染，按溢出物处理流程处置，使用5500 mg/L含氯消毒液，消毒1 h	需要时
其它
?	乳胶手套、连体防护服、医用外科口罩、医用防护口罩（KN95、N95等过滤效率95%以上的规格）、防护帽、鞋套、快速手消毒剂物资清点，　需可使用一周	每周
?	轮流抽取1/2人员进行手卫生培养报告，卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10 cfu/cm2	每月
?	灭活室、核酸提取室、产物分析室、新冠样本途经通道（实验室区域）空气培养报告，要求细菌菌落总数小于4 CFU/（5 min，直径9 cm平皿）	每月
?	喷洒液、洗手液培养报告，要求自配消毒液浓度指示卡变色达标，月度培训细菌菌落总数小于100CFU/ml	每月

表4 实验室人员防护安全标准

内容		频次
实验前-前
?	实验室地面（包括运输通道）用1000 mg/L含氯消毒液喷洒消毒，自然挥发	每日
?	公共区域表面（含电梯、门把手等）用1000 mg/L含氯消毒液喷洒消毒，自然挥发	每日
?	标本运输至实验室，接收开箱，用75%乙醇喷雾消毒，从密封袋取出后，再次喷雾消毒	每日
实验前
?	当天参与新冠病毒检测的工作人员实验前需登记身体状态，实验前测量体温，正常方可实验	每日
?	工作人员当天个人防护穿戴检查：	每日
?	1.双手轻按口罩，刻意呼吸，空气未从边缘漏出；刻意吸气，口罩立即稍凹陷	?
?	2.尽量将鞋、鞋带都包入鞋套	?
?	3.穿着顺序：洁净区：洗手、第一副乳胶手套、医用帽子、N95口罩、防护镜、鞋套、防护服半污染区：第二副乳胶手套	?
?	当天的生物安全柜开关机、风速、紫外线灯、前挡玻璃开启高度等都正常	每日
?	打开样本容器或有可能产生气溶胶的操作，必须在生物安全柜内进行	每日
实验中		?
?	PCR各室之间的试剂、样本等传递使用传递窗	每日
?	PCR外房屋间的样本转运使用带盖的专用转运箱，使用1000 mg/L含氯消毒液擦拭消毒	每日
?	离心管朝同方向放置，使用吸痰器吸上清，必要时吸头拉长确保能在生物安全柜操作	每日
?	实验后
?	物品清理：当天实验完成后所有与新冠病毒检测相关的物品需打包；生物安全柜内物品整理，废物清理，排风口不能被挡住	每日
?	扩增结束后的八联管用密封袋装好，并用5500 mg/L有效氯消毒水对密封袋内外部进行消毒，置于废物桶中	每日
?	清洁消毒：当天实验完成后新冠病毒检测的医疗废物都需要高压消毒灭菌，含防护服。台面、生物安全柜内部表面、仪器表面、地面等　都需要使用1000 mg/L含氯消毒液擦拭消毒	每日
?	工作人员当天个人防护脱弃检查：	每日
?	鞋套从后部反向拉开，慢慢卷至鞋头	?
?	右手轻拉左手手套边，污染面反向里面，左手从右手手套边的里面反向拉，避免接触手台外面	?
?	防护衣里面反过来切忌扬起，切忌接触自身衣物，卷好丢弃	?
?	双手从后脑勺插入头套撑开脱下，从里向外卷起丢弃	?
?	眼罩、面罩放进装有2000 mg/L的专用浸泡桶中，浸泡10~20 min，再用清水冲洗干净。擦干后放置在洁净区进行紫外消毒	?
?	脱弃顺序：污染区：第二副乳胶手套、防护服	?
?	半污染区：手消毒、护目镜、N95口罩、医用帽子、鞋套、第二副乳胶手套、洗手	?
?	当天PCR室所有工作完成后，使用移动紫外线灯消毒1 h	每日
?	在医疗废水中按比例加入消毒片，使含氯浓度达到2000 mg/L	每日
?	应客户要求的新冠样本的储存需双人双锁	每日
?	高压灭菌温度和时间为121℃ 30 min，指示卡变色符合监测要求	每日
?	若出现样本泼洒污染，按溢出物处理流程处置，使用5500 mg/L含氯消毒液，消毒1 h	需要时
其它
?	乳胶手套、连体防护服、医用外科口罩、医用防护口罩（KN95、N95等过滤效率95%以上的规格）、防护帽、鞋套、快速手消毒剂物资清点，　需可使用一周	每周
?	轮流抽取1/2人员进行手卫生培养报告，卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10 cfu/cm2	每月
?	灭活室、核酸提取室、产物分析室、新冠样本途经通道（实验室区域）空气培养报告，要求细菌菌落总数小于4 CFU/（5 min，直径9 cm平皿）	每月
?	喷洒液、洗手液培养报告，要求自配消毒液浓度指示卡变色达标，月度培训细菌菌落总数小于100CFU/ml	每月

表5 开展新型冠状病毒检测前自查表

内容	合格标准
场地
检测场地符合PCR实验室设计要求，通过验收	具有PCR实验室验收合格证书且在有效期内
PCR室在卫生主管部门完成二级生物安全实验室备案	二级生物安全实验室备案证书
实验室院感监测情况	最近1月含PCR室的院感监测报告完整，包括空气培养、高压消毒灭菌效果监测、手卫生、使用中的消毒液等
实验室消毒液配制记录	最近1周含PCR室的消毒液配制记录完整，包括浓度检测
实验室紫外线消毒记录	最近1周PCR室、医疗废物储存间等紫外线消毒记录完整，包括紫外线强度或监测试纸对紫外线灯效果的监测
污水处理系统正常，污水消毒工作正常	污水检测合格材料、日常监测记录
人员
具有PCR检测、结果判读资质	PCR上岗证、检验职称职称证书接受操作、结果判读培训及考核，考核通过
防护
乳胶手套、连体防护服、护目镜、医用外科口罩、医用防护口罩（KN95、N95等过滤效率95%以上的规格）、帽子、鞋套、面屏、快速手消毒剂	需储存至少一周的量
设备
离心机	高速13 000 rpm
荧光定量PCR仪	校准合格
用于开展新型冠状病毒检测的PCR实验室生物安全柜型号	实验室为二级生物安全实验室的，可使用A2型生物安全柜，否则需使用B2型生物安全柜HEPA过滤器检测合格
检测试剂名称（试剂品牌可参照当地CDC要求）及批文	按要求执行
是否备有2家或2家以上有医疗器械产品注册证的试剂，1家用于日常检测，其它用于阳性复测。	按要求执行
若有全自动或半自动提取仪	有防护罩
流程
确定当地开展新冠病毒筛查的政策	明确政策要求，做好内部培训
取得上级主管部门的样本接收和样本检测授权	当地CDC或卫生主管部门的新型冠状病毒核酸检测授权书
包括物流收取、标本交接、处理、检测、防护用品穿脱、人员安全、污水/废物处理、工作人员及样本消毒的作业指导书及演练	有详细可操作的作业指导书、演练至少三次
阳性结果上报流程	双方协商后执行
实验室生物安全委员会进行全过程风险评估、应急预案	按要求执行
确认所在地疫情上报的主管部门	按要求执行

表5 开展新型冠状病毒检测前自查表

内容	合格标准
场地
检测场地符合PCR实验室设计要求，通过验收	具有PCR实验室验收合格证书且在有效期内
PCR室在卫生主管部门完成二级生物安全实验室备案	二级生物安全实验室备案证书
实验室院感监测情况	最近1月含PCR室的院感监测报告完整，包括空气培养、高压消毒灭菌效果监测、手卫生、使用中的消毒液等
实验室消毒液配制记录	最近1周含PCR室的消毒液配制记录完整，包括浓度检测
实验室紫外线消毒记录	最近1周PCR室、医疗废物储存间等紫外线消毒记录完整，包括紫外线强度或监测试纸对紫外线灯效果的监测
污水处理系统正常，污水消毒工作正常	污水检测合格材料、日常监测记录
人员
具有PCR检测、结果判读资质	PCR上岗证、检验职称职称证书接受操作、结果判读培训及考核，考核通过
防护
乳胶手套、连体防护服、护目镜、医用外科口罩、医用防护口罩（KN95、N95等过滤效率95%以上的规格）、帽子、鞋套、面屏、快速手消毒剂	需储存至少一周的量
设备
离心机	高速13 000 rpm
荧光定量PCR仪	校准合格
用于开展新型冠状病毒检测的PCR实验室生物安全柜型号	实验室为二级生物安全实验室的，可使用A2型生物安全柜，否则需使用B2型生物安全柜HEPA过滤器检测合格
检测试剂名称（试剂品牌可参照当地CDC要求）及批文	按要求执行
是否备有2家或2家以上有医疗器械产品注册证的试剂，1家用于日常检测，其它用于阳性复测。	按要求执行
若有全自动或半自动提取仪	有防护罩
流程
确定当地开展新冠病毒筛查的政策	明确政策要求，做好内部培训
取得上级主管部门的样本接收和样本检测授权	当地CDC或卫生主管部门的新型冠状病毒核酸检测授权书
包括物流收取、标本交接、处理、检测、防护用品穿脱、人员安全、污水/废物处理、工作人员及样本消毒的作业指导书及演练	有详细可操作的作业指导书、演练至少三次
阳性结果上报流程	双方协商后执行
实验室生物安全委员会进行全过程风险评估、应急预案	按要求执行
确认所在地疫情上报的主管部门	按要求执行

表6 不同品种耗材提取方法

标本类型	耗材	提取方法
鼻咽拭子	深圳梓健、江苏康健	取样本保存液，加RNA释放剂
	北京友康、深圳逗邦	取样本保存液，离心后去上清，加RNA释放剂
	康为世纪、南芯医疗	取样本保存液，离心去上清，沉淀中加生理盐水洗涤震荡后（因含胍盐和病毒灭活剂），离心去上清后加入RNA释放剂；或磁珠法
痰液	痰杯	4倍标本量体积的4%NaOH消化，0.9%生理盐水洗涤去上清后加入RNA释放剂

表6 不同品种耗材提取方法

标本类型	耗材	提取方法
鼻咽拭子	深圳梓健、江苏康健	取样本保存液，加RNA释放剂
	北京友康、深圳逗邦	取样本保存液，离心后去上清，加RNA释放剂
	康为世纪、南芯医疗	取样本保存液，离心去上清，沉淀中加生理盐水洗涤震荡后（因含胍盐和病毒灭活剂），离心去上清后加入RNA释放剂；或磁珠法
痰液	痰杯	4倍标本量体积的4%NaOH消化，0.9%生理盐水洗涤去上清后加入RNA释放剂

表7 RT~PCR结果报告及复测标准

场景	内容	结果报告	提取方法	复测试剂及结果判断
1	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40N基因和ORF1ab基因未检测到典型的S型扩增曲线或Ct>40	报告"阴性"	/	/
2	内标Ct值无扩增或>40	暂不报告，需复查	磁珠法	仍使用圣湘试剂复测，复查结果一致，退单建议重新采样
3	扩增曲线非S型	暂不报告，需复查	磁珠法	仍使用圣湘试剂复测，复查结果一致，退单建议重新采样
4	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40，单靶标阳性或双靶标（N基因和ORF1ab基因）Ct≤40	暂不报告，需复查	磁珠法	增加上海捷达诺、达安基因试剂复测，三种试剂中任意两种试剂或两种以上检测双靶标CT≤40报告阳性，单靶标阳性见5
5	复查N基因或ORF1ab基因Ct≤40，曲线呈典型S型	报告"可疑阳性"，增加建议与解释"此结果为可疑阳性，建议重新采样送检"	/	/
6	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40，N基因和ORF1ab基因为异常扩增峰（单一通道荧光信号有明显增幅，Ct值>40	暂不报告，需复查	磁珠法	增加上海捷达诺、达安基因试剂复测

表7 RT~PCR结果报告及复测标准

场景	内容	结果报告	提取方法	复测试剂及结果判断
1	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40N基因和ORF1ab基因未检测到典型的S型扩增曲线或Ct>40	报告"阴性"	/	/
2	内标Ct值无扩增或>40	暂不报告，需复查	磁珠法	仍使用圣湘试剂复测，复查结果一致，退单建议重新采样
3	扩增曲线非S型	暂不报告，需复查	磁珠法	仍使用圣湘试剂复测，复查结果一致，退单建议重新采样
4	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40，单靶标阳性或双靶标（N基因和ORF1ab基因）Ct≤40	暂不报告，需复查	磁珠法	增加上海捷达诺、达安基因试剂复测，三种试剂中任意两种试剂或两种以上检测双靶标CT≤40报告阳性，单靶标阳性见5
5	复查N基因或ORF1ab基因Ct≤40，曲线呈典型S型	报告"可疑阳性"，增加建议与解释"此结果为可疑阳性，建议重新采样送检"	/	/
6	内标有扩增曲线呈S型且Ct≤40，N基因和ORF1ab基因为异常扩增峰（单一通道荧光信号有明显增幅，Ct值>40	暂不报告，需复查	磁珠法	增加上海捷达诺、达安基因试剂复测

图1 新冠状病毒核酸检测流程图

1	Zhu N, Zhang D, Wang W, et al. A Novel Coronavirus from Patients with Pneumonia in China,2019[J]. N Engl J Med, 2020.
2	国家卫生健康委办公厅.关于印发新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）的通知[EB/OL].2002-02-04. URL
3	中华人民共和国卫生健康委员会.国家卫生健康委办公厅关于医疗机构开展新型冠状病毒核酸检测有关要求的通知（国卫办医函(2020)53号) [EB/OL]. 2020-01-15.
4	中华人民共和国国务院.病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院424令）[EB/OL]. 2018-04-04.
5	中华人民共和国卫生部.可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定[EB/OL]. 2005-12-28.
6	中华医学会检验分会. 2019新型冠状病毒肺炎临床实验室检测的生物安全防护指南（试行第一版）[EB/OL]. 2020-01-30.
7	广东省卫生健康委员会.广东省卫生健康委办公室关于印发广东省新型冠状病毒感染病例强化监测方案的通知（粤卫办应急函[2020]5号）[EB/OL]. 2020-01-27.

[1]	周灿, 史博慧, 杨谨, 李军涛, 许锐, 陈元元, 魏洪亮, 刘震, 邓智平, 樊东, 刁岩, 李雄雄, 白俊文, 任予. 乳腺癌患者新型冠状病毒感染后的临床症状：基于患者自报告结局的多中心横断面调查研究[J]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2023, 17(03): 157-162.
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