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中华临床实验室管理电子杂志

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2021, Vol. 09 ›› Issue (01) : 6 -11. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2021.01.002

所属专题： 文献；

实验研究

GP73表达调控的肝癌细胞模型的筛选和构建
叶佩灵1, 嘉红云1,†(), 彭亮2   
  1. 1. 510260　广东广州，广州医科大学附属第二医院检验科
    2. 510700　广东广州，广州医科大学附属第五医院检验科
  • 收稿日期:2020-11-03 出版日期:2021-02-28
  • 通信作者: 嘉红云
  • 基金资助:
    广东省医学科学技术研究基金项目(A2018153); 广州市卫生和计划生育科技项目(20181A011072)

Screening and construction of hepatocellular carcinoma cell model regulated by GP73 expression

Peiling Ye1, Hongyun Jia1,†(), Liang Peng2   

  1. 1. Department of Clinical Laboratory, The Second Affiliated Hospital,Guangzhou Medical University, Guangzhou 510260, China
    2. Department of Clinical Laboratory, The Fifth Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, Guangzhou 510700, China
  • Received:2020-11-03 Published:2021-02-28
  • Corresponding author: Hongyun Jia
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引用本文：

叶佩灵, 嘉红云, 彭亮. GP73表达调控的肝癌细胞模型的筛选和构建[J/OL]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2021, 09(01): 6-11.

Peiling Ye, Hongyun Jia, Liang Peng. Screening and construction of hepatocellular carcinoma cell model regulated by GP73 expression[J/OL]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2021, 09(01): 6-11.

目的

筛选合适的细胞株构建干扰和过表达GP73的肝癌细胞模型，为进一步深入研究GP73调控肝癌的机制提供合适的细胞模型。

方法

挑选8株肝癌细胞：Huh-7、Hep3B、MHCC-LM3、MHCC97-L、MHCC97-H、SNU-449、SNU-398、SNU-182，采用qPCR和Western Blot验证GP73的表达，根据结果确定一株肝癌细胞进行干扰和过表达GP73的研究。Transwell实验观察过表达GP73对选取的细胞株迁移、侵袭能力的影响。

结果

选用Hep3B细胞株进行干扰和过表达GP73，qPCR和Western Blot结果表明干扰组和过表达组的GP73表达和对照组比较均有显著差异(P＜0.05)；Transwell实验显示，过表达GP73能够明显促进Hep3B细胞的迁移和侵袭(P＜0.05)。

结论

干扰和过表达GP73的Hep3B细胞模型构建成功，为GP73调控肝癌的机制研究提供了可靠的研究模型，为后续研究提供了研究基础。

关键词: 细胞模型, GP73, 肝癌
Objective

To find the appropriate cell lines to construct interference and overexpression of hepatoma cell model, so as to provide a suitable cell model for further study on the mechanism of GP73 regulation of hepatocellular carcinoma.

Methods

Eight hepatoma cell lines were selected including Huh-7、Hep3B、MHCC-LM3、MHCC97-L、MHCC97-H、SNU-449、SNU-398、SNU-182. The expression of GP73 was verified by q-PCR and Western Blot. According to the results, a hepatoma cell line was selected for interference and overexpression of GP73. The effects of overexpression of GP73 on the migration and invasion of selected cells were observed by Transwell experiments.

Results

Hep3B cell lines were selected for interference and overexpression of GP73. q-PCR and Western Blot results showed that the expression of GP73 in Hep3B cell line was significantly different from that in control group (P＜0.05).Transwell experiments indicated that overexpression of GP73 can significantly promote the migration and invasion of Hep3B cells.

Conclusion

The successful construction of Hep3B cell model provides a reliable research model for the mechanism of GP73 regulation of hepatocellular carcinoma, and provides a research basis for the following study.

Key words: Cell model, GP73, Primary liver cancer
表1 干扰片段序列
基因名称 序列
sense(5'-3') antisense(5'-3')
si-GP73 CAAGCUGUACCAGGACGAATT UUCGUCCUGGUACAGCUUGTT
siRNA NC CCAUAAGGACGUCAGACGATT UCGUCUGACGUCCUUATGGTT
表2 实时定量PCR引物序列
基因名称 Primer名称 序列(5'-3') 产物长度(bp)
GP73 GP73-F GCCGGAGCCTCGAAAAGAG 190
GP73-R TTCCAGCTCCATGATCCGTG
GAPDH GAPDH-F GAGTCAACGGATTTGGTCGT 185
GAPDH-R GACAAGCTTCCCGTTCTCAG
图1 qPCR检测8株肝癌细胞株中GP73mRNA的表达
图2 Western Blot检测8株肝癌细胞株中GP73蛋白的表达
图3 重组质粒的双酶切鉴定电泳图
图4 qPCR检测MHCC-LM3细胞株干扰和过表达GP73后GP73mRNA的表达
图5 qPCR检测Hep3B细胞株干扰和过表达GP73后GP73mRNA的表达
图6 Western Blot检测Hep3B细胞株干扰和过表达GP73后GP73蛋白的表达
图7 过表达GP73对Hep3B细胞迁移、侵袭能力的影响
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