切换至 "中华医学电子期刊资源库"
高级检索
中华临床实验室管理电子杂志

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2021, Vol. 09 ›› Issue (01) : 6 -11. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2021.01.002

所属专题： 文献；

实验研究

GP73表达调控的肝癌细胞模型的筛选和构建
叶佩灵1, 嘉红云1,†(), 彭亮2   
  1. 1. 510260　广东广州，广州医科大学附属第二医院检验科
    2. 510700　广东广州，广州医科大学附属第五医院检验科
  • 收稿日期:2020-11-03 出版日期:2021-02-28
  • 通信作者: 嘉红云
  • 基金资助:
    广东省医学科学技术研究基金项目(A2018153); 广州市卫生和计划生育科技项目(20181A011072)

Screening and construction of hepatocellular carcinoma cell model regulated by GP73 expression

Peiling Ye1, Hongyun Jia1,†(), Liang Peng2   

  1. 1. Department of Clinical Laboratory, The Second Affiliated Hospital,Guangzhou Medical University, Guangzhou 510260, China
    2. Department of Clinical Laboratory, The Fifth Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, Guangzhou 510700, China
  • Received:2020-11-03 Published:2021-02-28
  • Corresponding author: Hongyun Jia
全文 ( ) 下载PDF ( ) 导出引用
引用本文：

叶佩灵, 嘉红云, 彭亮. GP73表达调控的肝癌细胞模型的筛选和构建[J]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2021, 09(01): 6-11.

Peiling Ye, Hongyun Jia, Liang Peng. Screening and construction of hepatocellular carcinoma cell model regulated by GP73 expression[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2021, 09(01): 6-11.

目的

筛选合适的细胞株构建干扰和过表达GP73的肝癌细胞模型，为进一步深入研究GP73调控肝癌的机制提供合适的细胞模型。

方法

挑选8株肝癌细胞：Huh-7、Hep3B、MHCC-LM3、MHCC97-L、MHCC97-H、SNU-449、SNU-398、SNU-182，采用qPCR和Western Blot验证GP73的表达，根据结果确定一株肝癌细胞进行干扰和过表达GP73的研究。Transwell实验观察过表达GP73对选取的细胞株迁移、侵袭能力的影响。

结果

选用Hep3B细胞株进行干扰和过表达GP73，qPCR和Western Blot结果表明干扰组和过表达组的GP73表达和对照组比较均有显著差异(P＜0.05)；Transwell实验显示，过表达GP73能够明显促进Hep3B细胞的迁移和侵袭(P＜0.05)。

结论

干扰和过表达GP73的Hep3B细胞模型构建成功，为GP73调控肝癌的机制研究提供了可靠的研究模型，为后续研究提供了研究基础。

关键词: 细胞模型, GP73, 肝癌
Objective

To find the appropriate cell lines to construct interference and overexpression of hepatoma cell model, so as to provide a suitable cell model for further study on the mechanism of GP73 regulation of hepatocellular carcinoma.

Methods

Eight hepatoma cell lines were selected including Huh-7、Hep3B、MHCC-LM3、MHCC97-L、MHCC97-H、SNU-449、SNU-398、SNU-182. The expression of GP73 was verified by q-PCR and Western Blot. According to the results, a hepatoma cell line was selected for interference and overexpression of GP73. The effects of overexpression of GP73 on the migration and invasion of selected cells were observed by Transwell experiments.

Results

Hep3B cell lines were selected for interference and overexpression of GP73. q-PCR and Western Blot results showed that the expression of GP73 in Hep3B cell line was significantly different from that in control group (P＜0.05).Transwell experiments indicated that overexpression of GP73 can significantly promote the migration and invasion of Hep3B cells.

Conclusion

The successful construction of Hep3B cell model provides a reliable research model for the mechanism of GP73 regulation of hepatocellular carcinoma, and provides a research basis for the following study.

Key words: Cell model, GP73, Primary liver cancer
表1 干扰片段序列
基因名称 序列
sense(5'-3') antisense(5'-3')
si-GP73 CAAGCUGUACCAGGACGAATT UUCGUCCUGGUACAGCUUGTT
siRNA NC CCAUAAGGACGUCAGACGATT UCGUCUGACGUCCUUATGGTT
表2 实时定量PCR引物序列
基因名称 Primer名称 序列(5'-3') 产物长度(bp)
GP73 GP73-F GCCGGAGCCTCGAAAAGAG 190
GP73-R TTCCAGCTCCATGATCCGTG
GAPDH GAPDH-F GAGTCAACGGATTTGGTCGT 185
GAPDH-R GACAAGCTTCCCGTTCTCAG
图1 qPCR检测8株肝癌细胞株中GP73mRNA的表达
图2 Western Blot检测8株肝癌细胞株中GP73蛋白的表达
图3 重组质粒的双酶切鉴定电泳图
图4 qPCR检测MHCC-LM3细胞株干扰和过表达GP73后GP73mRNA的表达
图5 qPCR检测Hep3B细胞株干扰和过表达GP73后GP73mRNA的表达
图6 Western Blot检测Hep3B细胞株干扰和过表达GP73后GP73蛋白的表达
图7 过表达GP73对Hep3B细胞迁移、侵袭能力的影响
1
Bary F, Ferlay J, Soerjomataram I, et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. ACJC, 2018, 68(6):394-424.
2
张宇龙. 基于RNA干扰技术沉默GP73基因对肝癌细胞增殖和凋亡影响的研究[D]. 兰州: 兰州大学, 2014.
3
叶佩灵, 何欣欣, 吴晓蔓. 原发性肝癌组织中GP73蛋白的表达[J]. 广东医学, 2014, 35(2):234-236.
4
叶佩灵, 吴晓蔓. 高尔基体糖蛋白73在原发性肝癌中的表达及意义[J]. 海南医学院学报, 2014, 20(1):83-86.
5
叶佩灵, 吴晓蔓. 血清GP73联合AFP、CEA、CA199、GGT检测在PHC早期筛查的应用价值[J]. 热带医学杂志, 2016, 16(4):467-470.
6
Ai N, Liu W, Li ZG, et al. High expression of GP73 in primary hepatocellular carcinoma and its function in the assessment of transcatheter arterial chemoembolization[J]. Oncol Lett, 2017, 14(4):3953-3958.
7
Kladney RD, Bulla GA, Guo Linsheng, et al. GP73, a novel golgi-localized protein upregulated by viral infection [J]. Gene, 2000, 249(1-2):53-65.
8
Wright LM, Huster D, Lutsenko S, et al. Hepatocyte GP73 expression in Wilson disease[J]. J Hepatol, 2009, 51(3):557-564.
9
王小华, 相祎, 王伟. 肝细胞肝癌血清GP73和HMGB1的表达水平及其联合检测意义[J]. 肝脏, 2018, (10):914-917.
10
Glenn S, Peter B, Craig WG, et al. Identification of novel clinical factors associated with hepatic fat accumulation in extreme obesity[J]. J Obes, 2014(2014):368210.
11
Yang Y, Liu Q, Li ZP, et al. GP73 promotes epithelial-mesenchymal transition and invasion partly by activating TG-β1/Smad2 signaling in hepatocellular carcinoma[J]. Carcinogenesis, 2018, 39(7):900-910.
12
陈默, 赵坤, 柳鹏程. RNA干扰技术沉默GP73对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响[J]. 上海交通大学学报, 2016(36), 11:1588-1593.
13
刘丽萍, 陈健康, 刘元明.高尔基体蛋白73在肝细胞癌转移及侵袭中的作用[J]. 中华肿瘤杂志, 2017, 39(7):497-501.
[1] 杨倩, 李翠芳, 张婉秋. 原发性肝癌自发性破裂出血急诊TACE术后的近远期预后及影响因素分析[J]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2024, 18(01): 33-36.
[2] 俞祺健, 杨喆, 郑树森. 预防肝癌肝移植术后肿瘤复发的研究现状及进展[J]. 中华移植杂志(电子版), 2023, 17(03): 171-179.
[3] 张文华, 陶焠, 胡添松. 不同部位外生型肝癌临床病理特点及其对术后肝内复发和预后影响[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(06): 651-655.
[4] 王楚风, 蒋安. 原发性肝癌的分子诊断[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(05): 499-503.
[5] 张海涛, 贾哲, 马超, 张其坤, 武聚山, 郭庆良, 曾道炳, 栗光明, 王孟龙. 手术切除与射频消融治疗血管周围型单发小肝癌临床疗效分析[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(05): 523-527.
[6] 李翠平, 陈晓燕, 钱师宇, 林惠珠, 曾彩辉, 阳莉, 卢建溪. 不同抗凝剂保存液对脐血培养的NK细胞增殖及杀伤效应的影响[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(05): 572-576.
[7] 韩冰, 顾劲扬. 深度学习神经网络在肝癌诊疗中的研究及应用前景[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(05): 480-485.
[8] 赫嵘, 贾哲, 张珂, 李代京, 张萌, 蒋力. 基于PSM分析腹腔镜肝切除联合Hassab术治疗合并门静脉高压症肝癌疗效[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(04): 376-383.
[9] 葛云鹏, 崔红元, 宋京海. 人工智能在原发性肝癌诊断、治疗及预后中的应用[J]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2023, 12(04): 367-371.
[10] 马金栋, 焦向飞, 蔡婷婷, 陈强谱. 肌肉减少症与肝癌研究进展[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(03): 356-359.
[11] 吴雅琴, 莫伟, 向华, 李琴, 李玉莲, 周碧芳. 肝癌患者介入术后股动脉穿刺处出血的研究进展[J]. 中华介入放射学电子杂志, 2023, 11(04): 352-356.
[12] 蔡晓雯, 丘婕, 李慧景, 杨翼帆, 陈秀梅. 基于心身整体护理系统的心理干预对肝癌患者心理健康的影响[J]. 中华介入放射学电子杂志, 2023, 11(04): 368-371.
[13] 黄学卿, 魏楠, 蒋天鹏, 安天志, 王黎洲, 许敏, 周石. 超声引导经远端桡动脉入路行肝癌TACE术的临床研究[J]. 中华介入放射学电子杂志, 2023, 11(03): 251-256.
[14] 吴雅琴, 莫伟, 向华, 李琴, 李兰. 肝癌患者介入治疗穿刺处出血影响因素的真实世界研究[J]. 中华介入放射学电子杂志, 2023, 11(02): 117-122.
[15] 曾嘉, 何东风. 介入栓塞材料在肝癌治疗中的研究进展[J]. 中华介入放射学电子杂志, 2023, 11(01): 62-67.
阅读次数
全文


摘要

版权所有 中华医学会 中华医学电子音像出版社有限责任公司  京ICP备14006079号-1  网络出版服务许可证：(署)网出证(京)字第075号