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中华临床实验室管理电子杂志

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2013, Vol. 01 ›› Issue (01) : 48 -54. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2013.01.010

实验研究

中国北方汉族抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎与TLR2/9基因多态性的相关性
吴子燕1, 徐涓娟1, 孙菲1, 陈华1, 吴庆军1, 郑文洁1, 李萍1, 宋宁1, 李永哲1,†(), 张奉春1   
  1. 1.100730 中国医学科学院北京协和医学院 北京协和医院风湿免疫科 教育部风湿免疫病学重点实验室
  • 收稿日期:2013-08-20 出版日期:2013-11-28
  • 通信作者: 李永哲
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目（81072486, 81172857）卫生公益性行业科研专项资助课题（201202004）

Association of Toll-like receptor 2 and 9 polymorphisms with antineutrophil cytoplasmic autoantibodiesassociated vasculitides in northern Han Chinese

Ziyan Wu1, Juanjuan Xu1, Fei Sun1, Hua Chen1, Qingjun Wu1, Wenjie Zheng1, Ping Li1, Ning Song1, Yongzhe Li1,†(), Fengchun Zhang1   

  1. 1.Department of Rheumatology and Clinical Immunology,Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Key Laboratory of Rheumatology and Clinical Immunology, Ministry of Education, Beijing 100730, China
  • Received:2013-08-20 Published:2013-11-28
  • Corresponding author: Yongzhe Li
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引用本文：

吴子燕, 徐涓娟, 孙菲, 陈华, 吴庆军, 郑文洁, 李萍, 宋宁, 李永哲, 张奉春. 中国北方汉族抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎与TLR2/9基因多态性的相关性[J/OL]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2013, 01(01): 48-54.

Ziyan Wu, Juanjuan Xu, Fei Sun, Hua Chen, Qingjun Wu, Wenjie Zheng, Ping Li, Ning Song, Yongzhe Li, Fengchun Zhang. Association of Toll-like receptor 2 and 9 polymorphisms with antineutrophil cytoplasmic autoantibodiesassociated vasculitides in northern Han Chinese[J/OL]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2013, 01(01): 48-54.

目的

探讨Toll 样受体2/9（Toll like receptor 2/9，TLR2/9）基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）与中国北方汉族人群抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplamic autoantibody，ANCA）相关性小血管炎（ANCA-associated vasculitis，AAV）易感性的相关性。

方法

采用回顾性病例对照设计。随机收集2011年11月至2012年12月北京协和医院门诊和住院的176例AAV患者，包括肉芽肿性多血管炎（granulomatosis with polyangiitis, GPA）100例、显微镜下多血管炎（microscopic polyangitis，MPA）76例，以及485名健康人，针对其TLR2/9基因标签SNP（tagger SNP）位点，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）进行TLR2/9基因分型。对检测数据先进行Hardy-Weinberg和基因型（HWE）平衡检验；然后，对等位基因频率和基因型频率进行关联分析；并比较各SNP位点在各组中等位基因频率；同时进行单体型分析。

结果

Rs3804100（TLR2）的C等位基因频率在MPA组[39.5%（60/76）]和健康对照组[27.9%（271/485）]的差异有统计学意义（Pc=0.026，OR 1.68，95%CI 1.18～2.40）；而在GPA组[26.5%（53/100）]和健康对照组的差异无统计学意义（χ2= 0.17，Pc＞0.05）。在单体型分析中，区域2的CC单体型频率在MPA组较健康对照组显著升高[39.5%（60/76）比27.6%（134/485）]，且差异有统计学意义（χ2= 8.74，Pc=0.022）。AAV组rs352139和rs187084（TLR9）与健康对照组的等位基因频率比较，差异均无统计学意义（χ2分别为 0.29、0.05，Pc均＞0.05）。

结论

首次发现TLR2 rs3804100位点与中国北方汉族人群MPA的易感性相关，而与GPA可能不相关。TLR9（rs352139、rs187084）可能与中国北方汉族人群的AAV（GPA和MPA）均不相关。

关键词: 抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎, 单核苷酸多态性, Toll 样受体

Objective

To investigate the role of the Toll-like receptor 2/9 (TLR2/9) single nucleotide polymorphisms(SNPs) in conferring susceptibility to the ANCA-associated vasculitis (AAV).

Methods

A retrospective grouped case-control design was applied. Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) was used to genotype the SNPs of TLR2/9 in 176 Chinese Han patients with AAV [100 cases of granulomatosis with polyangiitis (GPA), 76 cases of microscopic polyangitis (MPA)] and 485 ethnically matched healthy controls randomly collected in inpatient/outpatient department of Beijing Union Medical College Hospital from November 2011 to December 2012. The allele and genotype frequencies were used for association analysis. The distributions of genotype frequencies in each group were compared and haplotype frequencies were analyzed.

Results

A synonymous SNPs in the exon of TLR2 (rs3804100) was closely associated with the risk of MPA, and the frequencies of allele C in MPA patients and healthy controls were 39.5%(60/76) and 27.9%(271/485), respectively (Pc=0.026, OR1.68,95%CI 1.18-2.40). But the frequency of allele C in GPA patients was 26.5%(53/100) and was not associated with GPA (χ2=0.17, Pc＞0.05). Haplotype analysis showed CC haplotype frequencies in the region of 2 MPA groups were significantly higher than in the control group [39.5%(60/76) vs 27.6%(134/485)], and the differences were statistically significant (χ2=8.74, Pc=0.022). Also, there were no significant differences in the distribution of two TLR9 SNPs(rs352139, rs187084) between patients and healthy controls (χ2=0.29, 0.05, all of Pc＞0.05 respectively).

Conclusion

These results suggested that rs3804100 (TLR2) is closely associated with MPA but not GPA for the first time, while TLR9 SNPs (rs352139, rs187084) may be not associated with AAV, GPA or MPA.

Key words: Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies-associated vasculitides, Polymorphisms,single nucleotide, Toll like receptor
图1 GPA组和MPA组抗ANCA抗体分布情况 注：最左边蓝色椭圆中的9指9例抗PR3和抗MPO抗体均为阴性的GPA患者；蓝色黄色交叉的81指81例抗PR3抗体阳性，而抗MPO抗体阴性的GPA患者；蓝色绿色交叉的9指9例抗MPO抗体阳性，而抗PR3抗体阴性的GPA患者；黄色绿色交叉的1指1例抗PR3和抗MPO抗体均为阳性的GPA患者。最右边红色椭圆中的7指7例抗PR3和抗MPO抗体均为阴性的MPA患者；红色绿色交叉的65指65例抗MPO抗体阳性，而抗PR3抗体阴性的MPA患者；红色黄色交叉的3指3例抗PR3抗体阳性，而抗MPO抗体阴性的MPA患者；黄色绿色交叉的1指1例抗PR3和抗MPO抗体均为阳性的MPA患者
表1 TLR9不同SNPs各组中的等位基因频率分布[例（%）]
组别 例数 rs352139的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值 rs187084的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
G A C T
AAV组 176 147(41.8) 205(58.2) 1.07(0.84～1.37) 0.29 NS 135(40.2) 201(59.8) 1.03(0.80～1.33) 0.05 NS
GPA组 100 86(43.0) 114(57.0) 1.13(0.83～1.53) 0.58 NS 79(41.1) 113(58.9) 1.07(0.78～1.47) 0.18 NS
MPA组 76 61(40.1) 91(59.9) 1.00(0.71～1.42) 0.00 NS 56(38.9) 88(61.1) 0.97(0.69～1.40) 0.02 NS
健康对照组 485 389(40.1) 581(59.9) 380(39.5) 582(60.5)
表2 TLR9不同SNPs各组的基因型频率分布[例（%）]
组别 例数 rs352139 χ2值 Pc值 rs187084 χ2值 Pc值
G/G型 G/A型 A/A型 C/C型 C/T型 T/T型
AAV组 176 36(20.5) 75(42.6) 65(36.9) 2.29 NS 35(20.8) 65(38.7) 68(40.5) 3.99 0.95
GPA组 100 22(22.0) 42(42.0) 36(36.0) 2.34 NS 21(21.9) 37(38.5) 38(39.6) 3.02 NS
MPA组 76 14(18.4) 33(43.4) 29(38.2) 0.61 NS 14(19.4) 28(38.9) 30(41.7) 1.71 NS
健康对照组 485 78(16.1) 233(48.0) 174(35.9) 77(16.0) 226(47.0) 178(37.0)
表3 TLR2不同SNPs各组中的等位基因频率分布[例(%)]
组别 例数 rs1898830的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
G A
AAV组 176 142(40.6) 208(59.4) 0.82(0.64～1.05) 2.58 0.76
GPA组 100 89(45.0) 109(55.0) 0.98(0.72～1.33) 0.02 NS
MPA组 76 53(34.9) 99(65.1) 0.64(0.45～0.91) 6.07 0.10
健康对照组 485 431(45.6) 515(54.4)
组别 例数 rs11938228的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
A C
AAV组 176 138(39.2) 214(60.8) 0.80(0.62～1.03) 3.11 0.55
GPA组 100 86(43.0) 114(57.0) 0.94(0.69～1.27) 0.18 NS
MPA组 76 52(34.2) 100(65.8) 0.64(0.45～0.92) 5.82 0.11
健康对照组 485 433(44.6) 537(55.4)
组别 例数 rs3804099的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
C T
AAV组 176 125(35.5) 227(64.5) 1.17(0.91～1.52) 1.48 NS
GPA组 100 62(31.0) 138(69.0) 0.96(0.69～1.33) 0.07 NS
MPA组 76 63(41.5) 89(58.5) 1.51(1.06～2.14) 5.33 0.15
健康对照组 485 310(32.0) 660(68.0)
组别 例数 rs3804100的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
C T
AAV组 176 113(32.1) 239(67.9) 1.22(0.94～1.59) 2.17 0.98
GPA组 100 53(26.5) 147(73.5) 0.93(0.66～1.31) 0.17 NS
MPA组 76 60(39.5) 92(60.5) 1.68(1.18～2.40) 8.41 0.026
健康对照组 485 271(27.9) 699(72.1)
组别 例数 rs7656411的等位基因 OR(95% CI) χ2值 Pc值
T G
AAV组 176 162(46.3) 188(53.7) 0.94(0.74～1.20) 0.24 NS
GPA组 100 101(51.0) 97(49.0) 1.14(0.84～1.54) 0.68 NS
MPA组 76 61(40.1) 91(59.9) 0.73(0.52～1.04) 3.10 0.55
健康对照组 485 457(47.8) 499(52.2)
表4 TLR2不同SNPs各组的基因型频率分布[例(%)]
组别 例数 rs1898830 χ2值 Pc值
G/G型 G/A型 A/A型
AAV组 176 29(16.6) 84(48.0) 62(35.4) 2.67 NS
GPA组 100 20(20.2) 49(49.5) 30(30.3) 0.22 0.38
MPA组 76 9(11.8) 35(46.1) 32(42.1) 5.84 0.38
健康对照组 485 104(22.0) 223(47.1) 146(30.9)
组别 例数 rs11938228 χ2值 Pc值
A/A型 A/C型 C/C型
AAV组 176 26(14.8) 86(48.9) 64(36.3) 3.64 NS
GPA组 100 17(17.0) 52(52.0) 31(31.0) 1.22 NS
MPA组 76 9(11.8) 34(44.7) 33(43.5) 5.54 0.44
健康对照组 485 103(21.2) 227(46.8) 155(32.0)
组别 例数 rs3804099 χ2值 Pc值
C/C型 C/T型 T/T型
AAV组 176 23(13.1) 79(44.9) 74(42.0) 2.85 NS
GPA组 100 9(9.0) 44(44.0) 47(47.0) 0.23 NS
MPA组 76 14(18.4) 35(46.1) 27(35.5) 7.56 0.16
健康对照组 485 42(8.7) 226(46.6) 217(44.7)
组别 例数 rs3804100 χ2值 Pc值
C/C型 C/T型 T/T型
AAV组 176 19(10.8) 75(42.6) 82(46.6) 3.39 NS
GPA组 100 6(5.9) 41(40.6) 54(53.5) 0.19 NS
MPA组 76 13(17.1) 34(44.7) 29(38.2) 11.22 0.026
健康对照组 485 32(6.6) 207(42.7) 246(50.7)
组别 例数 rs7656411 χ2值 Pc值
T/T型 T/G型 G/G型
AAV组 176 38(21.7) 86(49.1) 51(29.2) 0.77 NS
GPA组 100 26(26.3) 49(49.5) 24(24.2) 1.05 NS
MPA组 76 12(15.8) 37(48.7) 27(35.5) 3.44 NS
健康对照组 485 103(21.5) 251(52.5) 124(26.0)
表5 TLR2不同SNPs的单体型在各组中的分布（%）
rs1898830+rs11938228组别 例数 AC单体型 GA单体型 GC单体型
频率 χ2值 Pc值 频率 χ2值 Pc值 频率 χ2值 Pc值
AAV组 176 58.8 2.23 ＞0.05 38.9 3.20 ＞0.05 2.0 1.27 ＞0.05
GPA组 100 54.0 0.00 ＞0.05 42.5 0.25 ＞0.05 3.0 3.81 ＞0.05
MPA组 76 65.1 6.37 ＞0.05 34.2 5.60 ＞0.05 0.7 0.31 ＞0.05
健康对照组 485 54.2 44.4 1.2
rs3804099+rs3804100组别 例数 TT单体型 CC单体型 CT单体型
频率 χ2值 Pc值 频率 χ2值 Pc值 频率 χ2值 Pc值
AAV组 176 64.5 1.31 ＞0.05 32.1 2.40 ＞0.05 3.4 0.45 ＞0.05
GPA组 100 69.0 0.10 ＞0.05 26.5 0.13 ＞0.05 4.5 0.03 ＞0.05
MPA组 76 58.5 5.09 ＞0.05 39.5 8.74 0.02 2.0 1.77 ＞0.05
健康对照组 485 67.8 27.6 4.2
图2 Haploview软件分析Hapmap CHB 数据和本研究的数据所得到的TLR2单体型分布图 注：a图为Hapmap计划中CHB的数据图;b图为本研究中所得到的单体型图,可见二者基本相同，侧面证实本研究结果的可靠性
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