枸杞多糖对大鼠角膜缘干细胞体外增殖的影响研究

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2020.04.013

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2020, Vol. 08 ›› Issue (04) : 246 -250. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2020.04.013

所属专题：文献；

实验研究

枸杞多糖对大鼠角膜缘干细胞体外增殖的影响研究

梁铮¹, 利嘉琦², 吕玉华¹, 蔡志梁³, 晁艳¹, 周厚全¹, 卢燕君^†(

)

^1. 510120　广州，广东省中医院输血科
^2. 510080　广州，广东省人民医院广东省临床检验中心
^3. 510405　广州，广州中医药大学第二临床医学院

收稿日期:2020-08-08 出版日期:2020-11-28
通信作者: 卢燕君
基金资助:
广东省中医药局科研项目(20181112); 广东省中医药局科研项目(20202080)

Research of effects of lyciumbarbarum polysaccharides on proliferation of the limbal stemcells in vitro

Zheng Liang¹, Jiaqi Li², Yuhua Lv¹, Zhiliang Cai³, Yan Chao¹, Houquan Zhou¹, Yanjun Lu^†()

^1. Blood Transfusion Department, Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China
^2. Guangdong Center for Clinical Laboratory, Guangdong Provincial People's Hospital, Guangzhou 510080, China
^3. The Second Clinical School of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, China

Received:2020-08-08 Published:2020-11-28
Corresponding author: Yanjun Lu
About author:
Corresponding author: Lu Yanjun, Email: 2356002195@qq.com

全文 ( ) 下载PDF ( ) 导出引用

引用本文：

梁铮, 利嘉琦, 吕玉华, 蔡志梁, 晁艳, 周厚全, 卢燕君. 枸杞多糖对大鼠角膜缘干细胞体外增殖的影响研究[J]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2020, 08(04): 246-250.

Zheng Liang, Jiaqi Li, Yuhua Lv, Zhiliang Cai, Yan Chao, Houquan Zhou, Yanjun Lu. Research of effects of lyciumbarbarum polysaccharides on proliferation of the limbal stemcells in vitro[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2020, 08(04): 246-250.

目的

通过体外分离和培养大鼠角膜缘干细胞(Limbal Stem Cells, LSCs)，观察枸杞多糖(Lyciumbarbarum Polysaccharide, LBP)对LSCs体外增殖的影响，为中药体外培养LSCs的研究提供实验资料。

方法

体外分离和培养LSCs，显微镜观察LSCs的细胞形态特征，通过免疫荧光检测转录因子p63初步鉴定大鼠LSCs；分对照组和枸杞多糖处理组，每组20例，免疫印迹检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen, PCNA)，初步探讨枸杞多糖对LSCs的增殖影响。

结果

镜下观察LSCs体积小，呈多边形或椭圆形，胞核较大，核质比例大，免疫荧光结果显示体外分离的LSCs可表达p63(阳性率为76.41±1.66%)；枸杞多糖处理后LSCs的PCNA蛋白的表达水平高于对照组，并且随着枸杞多糖浓度的增加，PCNA蛋白的表达升高(P<0.05)。

结论

枸杞多糖对LSCs的增殖和生长具有促进和维持的作用。

关键词: 角膜缘干细胞, 枸杞多糖, 体外培养, p63, PCNA

Objective

To observe the effects of Lyciumbarbarum polysaccharide(LBP)on the proliferation of limbal stem cells (LSCs) by isolation and culture of LSCs of rat in vitro, and to provide experimental data for the study of LSCs cultured in traditional Chinese medicine in vitro.

Methods

LSCswere isolated and subcultured in vitro, which were preliminarily identified by the characteristics of cells morphology with microscope and the detection of transcription factor p63 with immunofluorescence. Assess the impact of LBP on LSCs proliferation. Control group and LBP group with 20 cases in each group. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was detected by Western blot.

Results

LSCs observed under the microscope were small in size, polygonal or elliptical, with large nuclei and a large proportion of nucleus/cytoplasm. Immunofluorescence showed that isolation and culture of LSCs of rat in vitro could express p63 with positive rate 76.41±1.66%; the expression of PCNA in the LBP group was significantly higher than that in the control group (P<0.05).

Conclusion

LSCs were isolated and cultured in vitro preliminarily, and LBP can promote and maintain the proliferation and growth of LSCs in vitro.

Key words: Limbal stem cells, Lyciumbarbarum polysaccharide, Culture in vitro, p63, Proliferating cell nuclear antigen

图1 大鼠LSCs形态

图2 免疫荧光检测p63

图3 枸杞多糖培养大鼠LSCs细胞（P<0.05）

表1 枸杞多糖培养大鼠LSCs细胞(±SD，n=3)

组别	灰度值比值（PCNA/Tublin）
对照组	51±4
枸杞多糖200 mg/L	113±11^*
枸杞多糖800 mg/L	151±4^*

表1 枸杞多糖培养大鼠LSCs细胞(±SD，n=3)

组别	灰度值比值（PCNA/Tublin）
对照组	51±4
枸杞多糖200 mg/L	113±11^*
枸杞多糖800 mg/L	151±4^*

图4 Western blot检测PCNA的表达

表2 枸杞多糖浓度梯度灰度值比较(±SD，n=3)

组别	灰度值比值（PCNA/Tublin）
对照组	0.69±0.06
枸杞多糖100 mg/L	0.84±0.05
枸杞多糖200 mg/L	1.35±0.05^*
枸杞多糖400 mg/L	1.39±0.10^*
枸杞多糖800 mg/L	2.11±0.22^*

表2 枸杞多糖浓度梯度灰度值比较(±SD，n=3)

组别	灰度值比值（PCNA/Tublin）
对照组	0.69±0.06
枸杞多糖100 mg/L	0.84±0.05
枸杞多糖200 mg/L	1.35±0.05^*
枸杞多糖400 mg/L	1.39±0.10^*
枸杞多糖800 mg/L	2.11±0.22^*

1	李典睿, 周善璧. 角膜缘干细胞研究新进展[J]. 国际眼科杂志, 2019, 19(1): 63-65.
2	刘强, 苏敏, 胡蓉, 等. NGF对角膜缘干细胞体外扩增的影响[J].局解手术学杂志, 2013, 22(2): 127-130.
3	张丹凤, 庄铭忠. 角膜缘干细胞识别的研究进展[J].眼科研究, 2006,24(3): 324-326.
4	闫实, 马蕾. 原代培养角膜缘干细胞与ΔNp63蛋白表达的年龄相关性研究 [J]. 眼科研究, 2009,27(3):193-195.
5	刘慧莲. 枸杞多糖对小鼠精原干细胞增殖作用的影响[J]. 安徽农业科学, 2012, 40(3): 1490-1492.
6	马良宏, 邱志军, 闫圣男, 等. 枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响 [J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2011, 15(23): 4277-4281.
7	燕宪涛, 路新国. 枸杞多糖生物活性的研究进展[J]. 中国食物与营养, 2011, 17(11):73-75.
8	苏敏, 肖莉, 黄悦, 等. 兔角膜缘干细胞的体外培养、鉴定及形态学特点 [J]. 第三军医大学学报, 2010, 32(16): 1762-1765.
9	许中中, 余晓菲, 王丽娅. 改良组织块培养法体外培养人角膜上皮干细胞 [J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(25): 4012-4017.
10	Mckeon F. p63 and the epithelial stem cell: more than status quo?[J]. Genes Dev, 2004, 18(5): 465-469.
11	马文群, 李利敏, 宋国智. 增殖细胞核抗原与肿瘤关系的研究进展 [J]. 河北医药, 2011, 33(4): 600-602.

[1]	吕宝军, 张红雨, 王晓鸿, 苟新敏. 乳腺癌组织TLR4蛋白表达及与细胞凋亡和增殖的关系[J]. 中华普通外科学文献(电子版), 2011, 05(03): 211-213.
[2]	熊蓉, 李战梅, 冯刚. 诱导多能干细胞向角膜上皮细胞分化的研究进展[J]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2017, 07(06): 356-359.
[3]	张明昌, 谢华桃. 重视角膜上皮屏障功能的保护[J]. 中华眼科医学杂志(电子版), 2017, 07(06): 241-244.

阅读次数

全文

摘要

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Research of effects of lyciumbarbarum polysaccharides on proliferation of the limbal stemcells in vitro

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Research of effects of lyciumbarbarum polysaccharides on proliferation of the limbal stemcells in vitro