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中华临床实验室管理电子杂志

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2021, Vol. 09 ›› Issue (02) : 65 -70. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2021.02.001

所属专题： 文献；

实验研究

尿路感染粪肠球菌耐药性与耐药基因相关性研究
麦杏连1, 刘思瑶1, 陈旋1, 何倩君1, 张中文1, 钟国权1, 温伟洪1, 徐令清1,†()   
  1. 1. 511518　广东清远，广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院检验科
  • 收稿日期:2021-01-08 出版日期:2021-05-28
  • 通信作者: 徐令清
  • 基金资助:
    广东省中医药局项目(20201407); 广东省科技创新战略专项资金(DZXQY002); 清远市人民医院医学科研基金支持项目(20190209); 广东省医学科学技术研究基金(A2021490，B2019187)

Correlational study between drug resistance and resistance genes of Enterococcus faecalis in urinary tract infection

Xinglian Mai1, Siyao Liu1, Xuan Chen1, Qianjun He1, Zhongwen Zhang1, Guoquan Zhong1, Weihong Wen1, Lingqing Xu1,†()   

  1. 1. The Sixth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University/Qingyuan People's Hospital, Qingyuan Guangdong 511518, China
  • Received:2021-01-08 Published:2021-05-28
  • Corresponding author: Lingqing Xu
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引用本文：

麦杏连, 刘思瑶, 陈旋, 何倩君, 张中文, 钟国权, 温伟洪, 徐令清. 尿路感染粪肠球菌耐药性与耐药基因相关性研究[J]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2021, 09(02): 65-70.

Xinglian Mai, Siyao Liu, Xuan Chen, Qianjun He, Zhongwen Zhang, Guoquan Zhong, Weihong Wen, Lingqing Xu. Correlational study between drug resistance and resistance genes of Enterococcus faecalis in urinary tract infection[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2021, 09(02): 65-70.

目的

对临床尿液标本中分离的粪肠球菌进行耐药基因与细菌耐药性分析，为粪肠球菌感染提供防治依据。

方法

对我院临床送检尿液标本中的粪肠球菌38株进行药敏分析，对Ⅰ类整合酶基因以及耐药基因(qacE△1-sull基因、tetM、ermB、aac(6′)/aph(2″)、aph3′Ⅲ、ant(6)Ⅰ、VanA、VanB)进行检测，阳性标本PCR产物进行测序分析及比对，并对耐药基因携带情况与耐药表型进行分析。

结果

38株粪肠球菌对12种抗生素耐药率从高到低为：红霉素(100%，38/38)、四环素(94.74%，36/38)、环丙沙星(47.37%，18/38)、左氧氟沙星(47.37%，18/38)、莫西沙星(44.74%，17/38)、高水平庆大霉素协同(31.58%，12/38)、呋喃妥因 (5.26%，2/38)、氨苄青霉素 (5.26%，2/38)、青霉素 (5.26%，2/38)、利奈唑胺 (2.63%，1/38)、万古霉素 (0%)、替考拉宁 (0%)；耐药基因阳性率从高到低：tetM为92.11% (35/38)、qacE△1-sull为78.95% (31/38)、aph3′Ⅲ为71.05% (27/38)、aac (6′)/aph (2″)为44.74% (17/38)、ant (6)Ⅰ为34.21% (13/38)，未检测出ermB基因、VanA基因、VanB基因和Ⅰ类整合子酶基因。

结论

粪肠球菌对临床常用药物具有不同程度耐药，多药耐药性与耐药基因携带有一定相关性，未检测到Ⅰ类整合子阳性菌株，可能与区域差异有关。

关键词: 粪肠球菌, 耐药基因, 耐药性, 整合子
Objective

To study the relationship between bacterial drug resistance and resistance genes of Enterococcus faecalis isolated from urinary tract infection, so as to provide the prevention and treatment basis for Enterococcus faecalis infection.

Methods

38 strains of Enterococcus faecalis with clinical urinary tract infection were collected and analyzed for drug sensitivity, theⅠ class integrase genes and drug resistant genes (qacE delta 1 - sull gene, tetM, ermB, aac (6′)/aph (2′,′), aph3′Ⅲ, ant (6) Ⅰ, VanA, VanB) were detected. PCR products of positive samples were sequenced and analyzed, and the carrying status of drug-resistant genes and phenotypes were analyzed.

Results

The drug resistance rate of 38 strains of Enterococcus faecalis to 12 antibiotics was from high to low: E(100%, 38/38), TE (94.74%, 36/38), CIP (47.37%, 18/38), LVX (47.37%, 18/38), MXF (44.74%, 17/38), HLS (31.58%, 12/38), FM (5.26%, 2/38), AMP (5.26%, 2/38), P (5.26%, 2/38), LNZ (2.63%, 1/38), VA (0%), TEC (0%); The positive rate of drug-resistant genes ranged from high to low: the positive rate of tetM gene was 92.11% (35/38), the positive rate of qacE △ 1-sull gene was 78.95% (31/38), the positive rate of aph3′Ⅲ gene was 71.05% (27/38), aac (6′)/aph (2″) gene positive rate was 44.74% (17/38), ant (6) I gene positive rate was 34.21% (13/38), and 38 strains were not detected ermB gene, VanA gene, VanB gene and Ⅰ class integron enzyme gene.

Conclusions

The drug resistance rate of 38 strains of Enterococcus faecalis to 12 antibiotics was from high to low: E (100%, 38/38), TE (94.74%, 36/38), CIP (47.37%, 18/38), LVX (47.37%, 18/38), MXF (44.74%, 17/38), HLS (31.58%, 12/38), FM (5.26%, 2/38),AMP (5.26%, 2/38), P (5.26%, 2/38), LNZ (2.63%, 1/38), VA (0%), TEC (0%); The positive rate of drug-resistant genes ranged from high to low: the positive rate of tetM gene was 92.11% (35/38), the positive rate of qacE △ 1-sull gene was 78.95% (31/38), the positive rate of aph3′Ⅲ gene was 71.05% (27/38), aac (6′)/aph (2″) gene positive rate was 44.74% (17/38), ant (6) Ⅰ gene positive rate was 34.21% (13/38), and 38 strains were not detected ermB gene, VanA gene, VanB gene and Ⅰ class integron enzyme gene.

Key words: Enterococcus faecalis, Drug resistance genes, Drug resistance, Integron
表1 整合子酶基因及耐药基因引物序列
目的基因 引物序列(5′→3′) 长度(bp)
Ⅰ类整合子酶基因F ACGAGCGCAAGGTTTCGGT 523
Ⅰ类整合子酶基因R GAAAGGTCTGGTCATACATG
qacE△1-sull F ATCGCAATAGTTGGCGAAGT 317
qacE△1-sull R GCAAGGCGGAAACCCGCGCC
aac(6′)/aph(2′) F CCAAGAGCAATAAGGGCATA 220
aac(6′)/aph(2′) R CACTATCATAACCACTACCG
aph(3′) F GCCGATGTGGATTGCGAAAA 292
aph(3′) R GCTTGATCCCCAGTAAGTCA
ant(6)-Ⅰ F ACTGGCTTAATCAATTTGGG 597
ant(6)-Ⅰ R GCCTTTCCGCCACCTCACCG
tet M F GTGTGACGAACTTTACCGAA 501
tet M R GCTTTGTATCTCCAAGAACAC
erm B F GAAAGGACTAACAAAA 533
erm B R AGTAACGGTACTTAAATTGTTTAC
VanAF GCTATTCAGCTGTACTC 738
VanAR CAGCGGCCATCATACGG
VanBF CATCGCCGTCCCCGAATTTCAAA 297
VanBR GATGCGGAAGATACCGTGGCT
表2 12种抗生素药敏实验结果
抗菌药物 敏感株数 敏感率(%) 耐药株数 耐药率(%)
TEC 38 100.00 0 0.00
VA 38 100.00 0 0.00
LNZ 37 97.37 1 2.63
P 36 94.74 2 5.26
AMP 36 94.74 2 5.26
FM 36 94.74 2 5.26
HLS 26 68.42 12 31.58
MXF 21 55.26 17 44.74
LVX 20 52.63 18 47.37
CIP 20 52.63 18 47.37
TE 2 5.26 36 94.74
E 0 0.00 38 100.00
表3 Ⅰ类整合子酶基因及8个耐药基因阳性率
耐药基因 阳性株数 阳性率(%)
tetM 35 92.11
qacE△1-sull 31 78.95
aph3′Ⅲ 27 71.05
aac(6′)/aph(2) 17 44.74
ant(6)Ⅰ 13 34.21
ermB 0 0.00
Ⅰ类整合子酶基因 0 0.00
VanA 0 0.00
VanB 0 0.00
图1 qacE△1-sull基因扩增结果
图2 aac(6′)/aph(2′)基因扩增结果
图3 aph(3′)基因扩增结果
图4 ant(6)I基因扩增结果
图5 tet M基因扩增结果
表4 7株耐药表型以及耐药基因组合相关性比较
样本号 耐药表型 耐药基因组合
1 f，g qacE△1-sull，aac(6′)/aph(2″)，tetM
2 d，f，g qacE△1-sull，aph3′III，aac(6′)/aph(2″)，ant(6)I，tetM
3 d，e，f，g qacE△1-sull，aph3′III，aac(6′)/aph(2″)，ant(6)I，tetM
4 e，f，g aac(6′)/aph(2″)，tetM
5 c，d，e，g，h qacE△1-sull，aac(6′)/aph(2″)
6 e，g qacE△1-sull
7 b，e，f，g qacE△1-sull，aph3′III，tetM
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