黄连对生物膜状态下耐氟康唑白色念珠菌凝集素样序列基因表达影响

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2022.02.004

目的

研究不同浓度黄连浸液对生物膜状态下耐氟康唑白色念珠菌凝集素样序列（ALS）基因mRNA表达量的影响。

方法

采用阴道白色念珠菌耐药株为研究对象，经甲基四氮盐（XTT）减低法筛选形成生物膜的白色念珠菌。在不同浓度黄连浸液干预下，通过RT-PCR检测生物膜黏附阶段ALS3/ALS4基因表达，观察黄连对白色念珠菌生物膜形成相关基因表达的抑制作用。

结果

当黄连浸液浓度为125 mg/L时，对白色念珠菌生物膜的形成阶段和成熟阶段的抑制率分别为88.6%和82.9%；黄连浸液干预下生物膜状态白色念珠菌黏附相关基因ALS3/ALS4的mRNA表达与药物浓度成负相关；当黄连浸液浓度大于4.023 mg/L时，黄连浸液干预下ALS3/ALS4的mRNA表达相对量与阴性对照比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论

黄连可以抑制白色念珠菌黏附相关基因ALS3 /ALS4的mRNA水平表达且呈剂量依赖关系。

关键词: 黄连, 白色念珠菌, 生物膜, 基因

Objective

To study the effect of different concentrations of Coptis chinensis extracts on the mRNA expression of ALS gene in Candida albicans under biofilm condition.

Methods

The drug-resistant strains of vaginal Candida albicans that formed biofilms were screened by the XTT reduction method. Under the intervention of Coptis chinensis at different concentrations, the expression of ALS3/ALS4 in the biofilm adhesion stage was detected by RT-PCR, and the inhibitory effect of Coptis chinensis on the expression of genes related to biofilm formation in Candida albicans was observed.

Results

When the concentration of Coptis chinensis was 125mg/L, the inhibition rate of candida albicans biofilm was 88.6% and 82.9%, respectively. The mRNA expression of adhesion related genes ALS3/ALS4 of Candida albicans in biofilm state was decreased under the intervention of Coptis chinensis with different concentrations. When the concentration of Coptis chinensis immersion solution was greater than 4.023mg/L, the mRNA expression relative level of ALS3/ALS4 under Coptis chinensis immersion intervention was significantly different from that of the negative control (P＜0.05).

Conclusion

Coptis chinensis inhibited the mRNA expression of Adhesion related gene ALS3 /ALS4 in Candida albicans in a dose-dependent manner.

Key words: Coptis chinensis, Candida albicans, Biofilm, Gene

图1 白色念珠菌生物膜生长曲线

表1 不同浓度黄连浸液对白色念珠菌浮游菌后的吸光度A值（

x ˉ

±s）

黄连浸液浓度（mg/L）	A_{492 nm}值
125.000	0.19±0.05^a
62.500	0.23±0.01^a
31.250	0.24±0.09^a
16.125	0.26±0.07^a
8.063	0.29±0.03^a
4.032	0.31±0.06^a
2.016	0.59±0.05^a
1.008	0.75±0.08^a
阴性对照组	0.84±0.10

表1 不同浓度黄连浸液对白色念珠菌浮游菌后的吸光度A值（

x ˉ

±s）

黄连浸液浓度（mg/L）	A_{492 nm}值
125.000	0.19±0.05^a
62.500	0.23±0.01^a
31.250	0.24±0.09^a
16.125	0.26±0.07^a
8.063	0.29±0.03^a
4.032	0.31±0.06^a
2.016	0.59±0.05^a
1.008	0.75±0.08^a
阴性对照组	0.84±0.10

表2 不同浓度黄连浸液对白色念珠菌生物膜的影响（

x ˉ

±s）

黄连浸液浓度（mg/L）	A_492nm值
黄连浸液浓度（mg/L）	24 h	48 h
125.000	0.175±0.003^a	0.191±0.005^a
62.500	0.221±0.002^a	0.234±0.006^a
31.250	0.237±0.004^a	0.241±0.009^a
16.125	0.246±0.007^a	0.253±0.004^a
8.063	0.274±0.008^a	0.287±0.003^a
4.032	0.294±0.006^a	0.306±0.005^a
2.016	0.342±0.005^a	0.479±0.008^a
1.008	0.468±0.008^a	0.504±0.006^a
阴性对照组	0.693±0.007	0.749±0.009

表2 不同浓度黄连浸液对白色念珠菌生物膜的影响（

x ˉ

±s）

黄连浸液浓度（mg/L）	A_492nm值
黄连浸液浓度（mg/L）	24 h	48 h
125.000	0.175±0.003^a	0.191±0.005^a
62.500	0.221±0.002^a	0.234±0.006^a
31.250	0.237±0.004^a	0.241±0.009^a
16.125	0.246±0.007^a	0.253±0.004^a
8.063	0.274±0.008^a	0.287±0.003^a
4.032	0.294±0.006^a	0.306±0.005^a
2.016	0.342±0.005^a	0.479±0.008^a
1.008	0.468±0.008^a	0.504±0.006^a
阴性对照组	0.693±0.007	0.749±0.009

表3 不同浓度黄连浸液抑制白色念珠菌生物膜形成的菌株数及抑制率

项目	黄连浸液浓度（mg/L）
项目	125.000	62.500	31.250	16.125	8.063	4.032	2.016	1.008	阴性对照组
24 h菌株数（株）	31	28	26	21	18	14	11	6	4
24 h抑制率（%）	88.6	80.0	74.2	60.0	51.4	40.0	31.4	17.1	11.4
48 h菌株数（株）	29	26	22	19	15	11	7	4	0
48 h抑制率（%）	82.9	74.2	62.9	54.3	42.9	31.4	20.0	11.4	0.0

表3 不同浓度黄连浸液抑制白色念珠菌生物膜形成的菌株数及抑制率

项目	黄连浸液浓度（mg/L）
项目	125.000	62.500	31.250	16.125	8.063	4.032	2.016	1.008	阴性对照组
24 h菌株数（株）	31	28	26	21	18	14	11	6	4
24 h抑制率（%）	88.6	80.0	74.2	60.0	51.4	40.0	31.4	17.1	11.4
48 h菌株数（株）	29	26	22	19	15	11	7	4	0
48 h抑制率（%）	82.9	74.2	62.9	54.3	42.9	31.4	20.0	11.4	0.0

图2 黄连浸液作用白色念珠菌生物膜细胞后ALS3基因扩增

图3 黄连浸液作用白色念珠菌生物膜细胞后ALS4基因扩增

表4 黄连浸液干预下ALS3和ALS4基因mRNA相对表达水平

黄连浸液浓度（mg/L）	mRNA相对表达水平
黄连浸液浓度（mg/L）	ALS3基因	ALS4基因
阴性对照组	1.00±0.11	1.03±0.12
1.008	0.96±0.08	0.93±0.09
2.016	0.84±0.03	0.85±0.06
4.032	0.50±0.04^a	0.49±0.07^a
8.063	0.34±0.02^a	0.26±0.03^a
16.125	0.27±0.07^a	0.23±0.04^a

表4 黄连浸液干预下ALS3和ALS4基因mRNA相对表达水平

黄连浸液浓度（mg/L）	mRNA相对表达水平
黄连浸液浓度（mg/L）	ALS3基因	ALS4基因
阴性对照组	1.00±0.11	1.03±0.12
1.008	0.96±0.08	0.93±0.09
2.016	0.84±0.03	0.85±0.06
4.032	0.50±0.04^a	0.49±0.07^a
8.063	0.34±0.02^a	0.26±0.03^a
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Effect of Coptis chinensis on ALS gene expression of Fluconazole resistant Candida albicans in biofilm state

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