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中华临床实验室管理电子杂志

中华临床实验室管理电子杂志 ›› 2022, Vol. 10 ›› Issue (01) : 17 -22. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2022.01.004

实验研究

一种灭活型样本保存液在新型冠状病毒核酸快速检测中的应用评价
赵莉1, 陆柔剑1, 叶飞1, 黄保英1, 王慧娟1, 谭文杰1,†()   
  1. 1. 102206　北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
  • 收稿日期:2021-06-22 出版日期:2022-02-28
  • 通信作者: 谭文杰
  • 基金资助:
    国家重点研发计划(2021YFC0863300，2020YFC0840900)

Evaluation of an inactivated sample preservation solution for rapid detection of SARS-CoV-2

Li Zhao1, Roujian Lu1, Fei Ye1, Baoying Huang1, Huijuan Wang1, Wenjie Tan1,†()   

  1. 1. National Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China
  • Received:2021-06-22 Published:2022-02-28
  • Corresponding author: Wenjie Tan
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引用本文：

赵莉, 陆柔剑, 叶飞, 黄保英, 王慧娟, 谭文杰. 一种灭活型样本保存液在新型冠状病毒核酸快速检测中的应用评价[J]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2022, 10(01): 17-22.

Li Zhao, Roujian Lu, Fei Ye, Baoying Huang, Huijuan Wang, Wenjie Tan. Evaluation of an inactivated sample preservation solution for rapid detection of SARS-CoV-2[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Management(Electronic Edition), 2022, 10(01): 17-22.

目的

评价含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的灭活效果及其对核酸快速检测的影响。

方法

通过测定灭活型样本保存液对SARS-CoV-2灭活前后病毒滴度变化，评价保存液的灭活效果；用灭活型样本保存液洗脱含有SARS-CoV-2模拟病毒的咽拭子样本，评价样本保存液对SARS-CoV-2核酸快速检测最低检测限和精密度的影响，并将SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中保存不同时间以评价保存液对SARS-CoV-2核酸检测的影响。

结果

灭活型样本保存液在5 min内可使SARS-CoV-2滴度至少下降2.76×105倍；灭活型样本保存液对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度无影响，对SARS-CoV-2核酸检测Ct值的CV小于5%；SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中于25 ℃或2 ℃~8 ℃条件下可至少稳定保存4 d。

结论

含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液可有效灭活SARS-CoV-2病毒，且灭活后病毒核酸检测不受影响，适用于核酸快速检测。

关键词: 冠状病毒科, 器官保存液, 表面活性剂, 核酸类
Objective

To evaluate the inactivation effect of sample preservation solution containing Triton X-100 and NP40 on novel coronavirus SARS-CoV-2 and its effect on rapid nucleic acid detection.

Methods

The virus inactivation effect was assessed by measuring the change of SARS-CoV-2 virus titer before and after the treatment with sample preservation solution . The influence on the minimum detection limit and precision of SARS-CoV-2 nucleic acid detection were evaluated by elution of throat swab samples containing SARS-CoV-2 simulated virus. The stability of nucleic acid of SARS-CoV-2 in the sample preservation solution was evaluated by spiking the SARS-CoV-2 virus in the solution and storing for different time.

Results

The SARS-CoV-2 virus titer decreased at least 2.76×105 times after being treated by the sample preservation solution in 5 minutes. The sample preservation solution had no effect on the sensitivity of SARS-CoV-2 nucleic acid detection, and the CV of SARS-CoV-2 nucleic acid detection Ct value was less than 5%. The SARS-CoV-2 virus can be stored in the sample preservation solution for at least 4 days at 25 ℃ or 2~8 ℃.

Conclusion

The sample storage solution containing surfactants Triton X-100 and NP40 can effectively inactivate virus, and the virus nucleic acid detection is not affected after inactivation, which is suitable for rapid nucleic acid detection.

Key words: Coronaviridae, Organ preservation solutions, Surface-active agents, Nucleic acids
表1 灭活型保存液洗脱的SARS-CoV-2梯度浓度样本的检测结果
组别

浓度

（拷贝/ml）

 Ct（平均） 检出率（%）
FAM ROX FAM ROX
实验组 800 20.46 20.74 100 100
400 21.86 22.02 100 95
200 23.69 23.84 70 55
100 23.70 24.03 25 15
对照组 800 20.08 20.91 100 100
400 21.82 22.18 100 95
200 23.51 23.90 65 55
100 23.72 23.85 25 15
表2 低值精密度检测结果
项目 ORF 1ab Ct值 N基因Ct值
20200726 20200933 20200934 20200726 20200933 20200934
1 18.62 19.10 19.45 18.70 18.96 18.76
2 18.73 18.71 19.06 18.44 19.46 18.90
3 17.78 19.77 19.45 18.46 18.65 18.71
4 19.56 19.82 19.13 18.73 19.06 19.38
5 18.97 19.78 19.20 18.34 18.39 18.45
6 19.60 19.82 19.23 18.92 18.81 19.54
7 19.02 19.04 19.11 17.00 18.71 19.32
8 19.22 19.36 18.69 17.87 18.25 18.61
9 19.13 18.96 18.47 18.53 18.65 18.49
10 18.47 19.15 18.97 17.19 18.46 19.07
批内CV（%） 2.87 2.15 1.61 3.60 1.89 2.05
批间CV（%） 2.39 3.00
表3 高值精密度检测结果
项目 ORF 1ab Ct值 N基因 Ct值
20200726 20200933 20200934 20200726 20200933 20200934
1 16.09 16.64 16.38 16.25 16.08 16.03
2 16.54 16.97 15.48 16.09 16.52 16.29
3 16.40 15.28 16.90 16.27 16.11 16.72
4 16.40 15.10 16.60 16.01 15.97 16.04
5 16.49 15.29 16.88 16.31 16.93 16.53
6 16.40 15.28 16.88 16.77 16.16 16.04
7 16.65 15.75 16.13 15.98 16.31 16.16
8 16.39 15.55 15.87 15.62 15.85 15.79
9 16.54 15.38 16.23 15.98 15.13 16.23
10 16.53 15.83 15.75 15.60 16.40 16.14
批内CV（%） 0.92 3.98 3.11 2.13 2.92 1.65
批间CV（%） 3.47 2.23
表4 对照组和实验组在25 ℃和2 ℃~8 ℃条件下保存的稳定性检测结果
保存温度（℃） 保存时间（天） 对照组（DMEM培养基） 实验组（灭活型样本保存液）
1 2 平均值 1 2 平均值
0 3.59 3.83 3.71 3.93 3.91 3.92
25 1 3.66 3.59 3.63 3.93 4.13 4.03
2 3.41 3.42 3.42 3.85 3.91 3.88
3 3.47 3.43 3.45 3.62 3.67 3.65
4 3.74 3.68 3.71 3.64 3.71 3.67
2~8 1 3.72 3.68 3.70 3.76 3.94 3.85
2 3.58 4.00 3.79 3.86 4.03 3.94
3 3.70 3.86 3.78 3.71 3.79 3.75
4 3.85 3.77 3.81 3.70 3.88 3.79
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